维生素检测仪样本采集与处理环节的不规范操作，是导致维生素B12检测值假性偏低的常见因素。血液样本采集时若使用肝素抗凝管，肝素会与维生素B12结合蛋白竞争性结合，使检测值降低15%-20%，某研究显示，肝素抗凝样本的维生素B12假性偏低率比血清样本高38%。样本离心不彻底时，红细胞残留释放的内源性钴胺素酶会降解维生素B12，4℃离心（3000转/分钟，10分钟）不充分的血浆样本，其检测值可降低12%-18%。若样本保存不当，如未及时分离血清且在室温放置超过4小时，维生素B12会因光氧化作用降解，每延长1小时检测值下降5%-8%，某实验室维生素检测仪数据显示，室温保存24小时的样本，维生素B12残留量仅为初始值的60%。
检测方法与设备运行偏差直接影响维生素B12的检测准确性。化学发光免疫分析法中，若抗体特异性不足，与内源性因子（如内因子抗体）结合产生竞争性抑制，可使检测值假性偏低20%-30%。电化学发光法的电极表面污染时，维生素B12的电化学反应效率降低，电流信号减弱，某案例中电极未及时抛光导致检测值比实际低25%。检测波长设置错误（如将361nm误设为340nm），吸光度测量偏差超过10%，会使结果出现系统性偏低。此外，标准曲线拟合方式选择不当，如使用线性拟合而非二次多项式拟合高浓度样本，可导致低浓度区间检测值低估15%-20%，某试剂盒说明书明确推荐二次拟合以提升准确性。
生理病理状态与药物干扰是造成维生素B12假性偏低的内在诱因。自身免疫性胃炎患者体内存在内因子抗体，与维生素B12竞争性结合受体，使检测值假性降低40%-60%，但实际活性维生素B12水平可能正常。长期服用二甲双胍者，肠道菌群改变影响维生素B12吸收，血清检测值可降低10%-25%，某队列研究显示，服药超过2年的患者中，35%出现检测值偏低。叶酸缺乏时，细胞内维生素B12的利用障碍，导致血清检测值假性偏低，而组织实际含量正常。此外，某些抗生素（如氯霉素）会抑制肠道菌群合成维生素B12，使血清检测值降低12%-18%，停药后1-2周可恢复正常。这些因素需结合维生素检测仪临床症状综合判断，避免单纯依据检测值误诊为维生素B12缺乏。